التفاصيل البيبلوغرافية
| العنوان: |
Isolation of novel immunogenic protein carriers for vaccine development |
| المؤلفون: |
Gomes, Marta Teresa da Silva |
| المساهمون: |
Oliveira, Hugo Alexandre Mendes, Fraga, Alexandra Gabriel |
| سنة النشر: |
2022 |
| المجموعة: |
Universidade of Minho: RepositóriUM |
| مصطلحات موضوعية: |
Acinetobacter, CRISPR/Cas9, Imunoinformática, Vacinologia reversa, Virulência, Immunoinformatics, Reverse vaccinology, Virulence |
| الوصف: |
Dissertação de mestrado em Biotecnologia ; Os antibióticos têm sido amplamente usados no tratamento de infeções bacterianas, contudo o seu uso extensivo e indiscriminado tem levado ao aparecimento de organismos resistentes. Acinetobacter baumannii é uma bactéria multirresistente, regularmente encontrada em infeções nosocomiais, e foi indicada pela Organização Mundial da Saúde como prioritária no desenvolvimento de novas estratégias antimicrobianas. Dentro das alternativas, as vacinas surgem como abordagens de profilaxia. Assim, neste projeto pretende-se desenvolver uma nova pipeline para prever o potencial imunogénico de proteínas bacterianas, validar e aumentar o número de proteínas imunogénicas contra A. baumannii. Neste estudo, 21 proteínas de A. baumannii ATCC 17978 foram selecionadas através de ferramentas de vacinologia reversa e imunoinformática. Destas, as proteínas NlpE e BamE selecionadas e comparadas com a Omp33 com imunogenicidade comprovada. Expressão heteróloga recombinante sem os péptidos de sinal N-terminais resultou em proteínas solúveis, e análise por Dicroísmo Circular confirmou o seu enrolamento correto. In vivo, avaliamos a resposta imune contra estas proteínas em ratinhos Balb/c, após três inoculações. Ensaios de ELISA mostraram que todas as proteínas induziram síntese de anticorpos, e análises histológicas não revelaram sinais de patogenicidade. Adicionalmente, a compreensão dos mecanismos de virulência dos microrganismos é essencial para a evolução das terapias. Assim, surge a questão se proteínas envolvidas na virulência têm potencial imunogénico e vice-versa. Portanto, pretendeu-se também estudar o papel das proteínas Omp33, NlpE e BamE na virulência da bactéria, através da construção de mutantes de A. baumannii ATCC 17978 por CRISPR/Cas9. Ensaios de cinética de crescimento, formação de biofilme e sobrevivência em contato com soro humano mostraram que, apesar da menor cinética de crescimento dos mutantes, estes apresentam uma maior capacidade de formar biofilmes e não apresentam ... |
| نوع الوثيقة: |
master thesis |
| وصف الملف: |
application/pdf |
| اللغة: |
English |
| العلاقة: |
https://hdl.handle.net/1822/82431Test; 203122372 |
| الإتاحة: |
https://hdl.handle.net/1822/82431Test |
| حقوق: |
info:eu-repo/semantics/openAccess ; http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0Test/ |
| رقم الانضمام: |
edsbas.D4C44F4E |
| قاعدة البيانات: |
BASE |
