رسالة جامعية
Uspostava ljudskih staničnih linija s endogeno eksprimiranim proteinom tubulinom fluorescentno obilježenim metodom CRISPaint ; Establishment of human cell lines with endogenous expression of protein tubulin fluorescently tagged using the CRISPaint method
| العنوان: | Uspostava ljudskih staničnih linija s endogeno eksprimiranim proteinom tubulinom fluorescentno obilježenim metodom CRISPaint ; Establishment of human cell lines with endogenous expression of protein tubulin fluorescently tagged using the CRISPaint method |
|---|---|
| المؤلفون: | Tintor, Erna |
| المساهمون: | Tolić, Iva Marija, Matulić, Maja |
| بيانات النشر: | Sveučilište u Zagrebu. Prirodoslovno-matematički fakultet. Biološki odsjek. University of Zagreb. Faculty of Science. Department of Biology. |
| سنة النشر: | 2023 |
| المجموعة: | Croatian Digital Theses Repository (National and University Library in Zagreb) |
| مصطلحات موضوعية: | HeLa, RPE1, diobeno vreteno, GFP, konfokalna mikroskopija, mitotic spindle, confocal microscopy, PRIRODNE ZNANOSTI. Biologija, NATURAL SCIENCES. Biology |
| الوصف: | Za promatranje procesa unutar žive stanice, većinom se koristi fluorescencijska mikroskopija. Glavni zahtjev fluorescencijske mikroskopije je to da željeni predmet proučavanja u stanici mora fluorescirati. Jedan od načina za promatranje stanice pod fluorescencijskim mikroskopom je da se stanični proteini obilježe fluorescentnim proteinima. Međutim, egzogeno unešene sekvence za fuzionirane proteine generiraju proteine s neprirodnom razinom ekspresije, a endogeni protein ostaje neobilježen. Endogeno obilježavanje staničnih proteina s fluorescentnim proteinima jedan je od načina za njihovu vizualizaciju bez utjecaja na jačinu ekspresije. Tehnologija CRISPR-Cas (engl. Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) često je korištena u genetičkom inženjerstvu za jednostavno i precizno uređivanje genoma. U ovom radu je korištena novo razvijena metoda CRISPaint (engl. CRISPR-assisted insertion tagging). To je sustav koji uz pomoć tehnologije CRISPR-Cas omogućava ugradnju gena za fluorescentni protein u genom tj. u ciljanu sekvencu gena, da bi se proizveo endogeni protein obilježeni fluorescentnim biljegom. Optimizirala sam protokol za transfekciju uz pomoć plazmida sustava CRISPaint-a i uspostavila sam dvije ljudske stanične linije, HeLa i RPE1, s endogeno obilježenim proteinom tubulinom sa zelenim fluorescentnim proteinom. Ove stanične linije se dalje mogu koristiti za promatranje stanične diobe pod fluorescencijskim mikroskopom, a metoda CRISPaint se može primijeniti za endogeno obilježavanje i drugih proteina od interesa. ; Fluorescence microscopy is used to observe processes inside a living cell and its main requirement is that the desired object of study in the cell must fluoresce. One way to observe a cell under a fluorescence microscope is to label cellular proteins with fluorescent proteins (FP). However, exogenously introduced sequences for fusion proteins produce proteins with unnatural expression levels while the endogenous protein remains unlabeled. Endogenous labeling of cellular proteins with ... |
| نوع الوثيقة: | master thesis |
| وصف الملف: | application/pdf |
| اللغة: | Croatian |
| العلاقة: | https://zir.nsk.hr/islandora/object/pmf:11548Test; https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:941693Test; https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:11548Test; https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:11548/datastream/PDFTest |
| الإتاحة: | https://zir.nsk.hr/islandora/object/pmf:11548Test https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:941693Test https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:11548Test https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:11548/datastream/PDFTest |
| حقوق: | http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0Test/ ; info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
| رقم الانضمام: | edsbas.B304A01F |
| قاعدة البيانات: | BASE |
| الوصف غير متاح. |