Clonamiento Molecular de las Asas Intracelulares de los receptores Muscarínicos M2 y M3 implicadas en la interacción con Proteínas G en el Músculo Liso Traqueal de Bovino
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Clonamiento Molecular de las Asas Intracelulares de los receptores Muscarínicos M2 y M3 implicadas en la interacción con Proteínas G en el Músculo Liso Traqueal de Bovino
En el músculo liso traqueal de bovino (MLTB) se ha propuesto una vía de señalización celular asociada con la actividad de una guanililciclasa de membrana plasmática (GCm) la cual se encuentra regulada por dos subtipos de receptores muscarínicos (mAChRs), m2 y m3 acoplados a proteínas G de manera opuesta. El objetivo del presente estudio fue la identificación de las secuencias primarias de las regiones intracelulares de los receptores muscarínicos implicadas en la interacción con las proteínas G que regulan a esta GCm. El cDNA del MLTB fue usado para la amplificación de las regiones intracelulares de los subtipos m2 y m3 utilizando oligonucleótidos cebadores específicos. Los productos de amplificación fueron identificados en geles de agarosa y posteriormente secuenciados, encontrándose un 99% de similitud con las secuencias obtenidas del bGen Data Bank de los mAChRs en cerebro de bovino. Este es el primer clonamiento molecular para los mAChRs presentes en MLTB y sugiere posibles similitudes con el cerebro de bovino en relación a la interacción receptor/proteína G. Two muscarinic receptors subtypes (mAChRs), m2 and m3, have been reported to regulate in opposite ways the activity of a membrane-bound guanylyl cyclase (GCm) via G-proteins in bovine tracheal smooth muscle (BTSM). The present study was undertaken to identify the primary sequences from intracellular loops of mAChRs subtypes from BTSM involved in the interaction with these G-proteins. cDNA from BTSM was used to amplify via RT-PCR, by using specific primers, the intracellular regions of m2 and m3 involved in the interaction with G-proteins. Amplification products for m3 and m2 loops were readily identified in agarose gel electrophoresis. Sequences for these loops were almost identical (99%) those found in bovine brain m2 and m3 mAChRs. This is the first molecular cloning of m2 and m3 mAChRS for BTSM. These results suggest the existence of similar mAChRs/G-proteins interactions in bovine airways.
