رسالة جامعية
Primjena molekularnih alata CRISPR/TET1-dSaCas9 i CRISPR/VPR-dSpCas9 u reaktivaciji gena HNF1A ; Application of CRISPR/TET1-dSaCas9 and CRISPR/VPR-dSpCas9 molecular tools for reactivation of HNF1A gene
| العنوان: | Primjena molekularnih alata CRISPR/TET1-dSaCas9 i CRISPR/VPR-dSpCas9 u reaktivaciji gena HNF1A ; Application of CRISPR/TET1-dSaCas9 and CRISPR/VPR-dSpCas9 molecular tools for reactivation of HNF1A gene |
|---|---|
| المؤلفون: | Vujić, Ana |
| المساهمون: | Zoldoš, Vlatka |
| بيانات النشر: | Sveučilište u Zagrebu. Prirodoslovno-matematički fakultet. Biološki odsjek. University of Zagreb. Faculty of Science. Department of Biology. |
| سنة النشر: | 2019 |
| المجموعة: | Croatian Digital Theses Repository (National and University Library in Zagreb) |
| مصطلحات موضوعية: | CRISPR/dCas9, gen HNF1A, TET1, VPR, CpG demetilacija, HNF1A gene, CpG demethylation, PRIRODNE ZNANOSTI. Biologija, NATURAL SCIENCES. Biology |
| الوصف: | Modifikacija sustava CRISPR-Cas9 uvođenjem deaktivirane endonukleaze Cas9 (dCas9), te vezanjem za nju katalitičkih domena epigenetičkih modifikatora i/ili transkripcijskih represora i aktivatora, omogućila je ciljanu manipulaciju epigenoma i ekspresije gena. Upotreba ortologa dCas9 te više sgRNA omogućava istovremenu manipulaciju više različitih gena i/ili epigenetičkih oznaka. Fuzija katalitičke domene enzima TET1 (od eng. Ten-eleven translocation) s dCas9 omogućava ciljanu demetilaciju DNA što rezultira povećanjem u ekspresiji gena dok fuzija transkripcijskog aktivatora VPR s dCas9 direktno utječe na aktivaciju gena. Cilj ovog istraživanja bio je izraditi testove za analizu metilacije DNA metodom bisulfitnog pirosekvenciranja kojima će se analizirati metilacija u CpG mjestima smještenim uzvodno i nizvodno od regulatorne regije gena HNF1A ciljane s fuzioniranim proteinima TET1-dSaCas9 i VPR-dSpCas9 u stanicama HEK293. Pokazala sam da dolazi do smanjenja stupnja metilacije u CpG mjestima smještenim uzvodno i nizvodno od ciljane regije nakon transfekcije stanica fuzijom TET1-dSaCas9 te dvostruke transfekcije stanica fuzijama TET1-dSaCas9 i VPR-dSpCas9. Metodom kvantitativnog PCR-a utvdila sam da su TET1-dSaCas9 i VPR-dSpCas9 uzrokovali povećanje transkripcijske aktivnosti gena HNF1A, a njihovo zajedničko djelovanje induciralo je dugotrajniji efekt na transkripcijsku aktivnost. ; Modification of the CRISPR-Cas9 system by introducing deactivated Cas9 endonuclease (dCas9) and binding the catalytic domains of epigenetic modifiers and/or transcriptional repressors and activators to it, enabled targeted manipulation of the epigenome and gene expression. The use of the dCas9 orthologs and multiple sgRNAs allows simultaneous manipulation of multiple different genes and/or epigenetic marks. The fusion of the catalytic domain of the TET1 (Ten-eleven translocation) enzyme with dCas9 allows targeted DNA demethylation resulting in an increase in gene expression, while the fusion of the VPR transcriptional activator with dCas9 ... |
| نوع الوثيقة: | master thesis |
| وصف الملف: | application/pdf |
| اللغة: | Croatian |
| العلاقة: | https://zir.nsk.hr/islandora/object/pmf:8329Test; https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:706758Test; https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:8329Test; https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:8329/datastream/PDFTest |
| الإتاحة: | https://zir.nsk.hr/islandora/object/pmf:8329Test https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:706758Test https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:8329Test https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:8329/datastream/PDFTest |
| حقوق: | http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0Test/ ; info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
| رقم الانضمام: | edsbas.22CC3078 |
| قاعدة البيانات: | BASE |
| الوصف غير متاح. |