DESENVOLVIMENTO, CARACTERIZAÇÃO E ATIVIDADE BIOLÓGICA DE VESÍCULAS LIPOSSOMAIS CONTENDO TRIÓXIDO DE ANTIMÔNIO E TRIÓXIDO DE ARSÊNIO
| العنوان: | DESENVOLVIMENTO, CARACTERIZAÇÃO E ATIVIDADE BIOLÓGICA DE VESÍCULAS LIPOSSOMAIS CONTENDO TRIÓXIDO DE ANTIMÔNIO E TRIÓXIDO DE ARSÊNIO |
|---|---|
| المؤلفون: | Viana, Altevir Rossato |
| المساهمون: | Mortari, Sergio Roberto, Krause, Luciana Maria Fontanari, Almeida, Luciana Yamamoto de, Maraschin, Bruna Jalfim, Krause , Alexandre, Rhoden, Cristiano Rodrigo Bohn |
| المصدر: | Repositório Institucional Universidade Franciscana Universidade Franciscana (UFN) instacron:UFN |
| بيانات النشر: | Universidade Franciscana, 2022. |
| سنة النشر: | 2022 |
| مصطلحات موضوعية: | bacteria, cancer, nanotechnology, metals, repositioning, Interdisciplinar, bactéria, câncer, nanotecnologia, metais, reposicionamento |
| الوصف: | Submitted by Clarice Rosa Machado (clarice.machado@ufn.edu.br) on 2022-07-07T12:26:55Z No. of bitstreams: 2 Tese_AltevirRossatoViana_SemAssinaturas.pdf: 2319753 bytes, checksum: facaf192f4ccb3464708f51b0f3a6e2c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2022-07-07T12:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_AltevirRossatoViana_SemAssinaturas.pdf: 2319753 bytes, checksum: facaf192f4ccb3464708f51b0f3a6e2c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2022-03-28 CAPES Currently, cancer and bacterial infections are amoung the main causes of death in the world. The resistance of these diseases to traditional treatments is the main factor for the development of studies in the area. Nanotechnology, combined with drug repositioning, can improve understanding, bioavailability, biocompatibility and consequently lead to the cure of patients. The drug encapsulation can prolong drug circulation time, increasing its therapeutic effects, such as accumulating in the tumor microenvironment. The objective of this thesis was to produce, characterize and analyze the morphology of liposomes containing Sb2O3 and As2O3 in different formulations, in addition to their biological activity in tumor cell lines, bacterial strains and in cleavage of plasmid DNA. Thus, this is an experimental in vitro study, where liposomal vesicles were produced by the reversed-phase evaporation method, followed by the use of a 750W probe with an amplitude of 40%. The liposomes were characterized by size assessment techniques, polydispersity index (IPD), zeta potential, pH analysis, active content, morphology and formulation components, using a previously calibrated potentiometer, inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP-OES), scanning electron microscopy with energy dispersive spectrometry (SEM-EDS) respectively. The stability of the formulations was evaluated through the physicochemical above at room temperature (25°C), refrigeration (4-8°C) and climatic chamber (40°C) in three different periods. Cytotoxicity was evaluated at 24 and 72 h, using Trypan Blue, 3-4,5-dimethyl-thiazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), Neutral Red and dsDNA PicoGreen; with tumor lines NB4, HL-60, T98G, U87MG, HepG2, A375 and A549. Furthermore, the production of reactive oxygen species (ROS) was evaluated by the Dichlorofluorescein assay (DCFH-DA) in tumor cells. The minimum inhibitory concentration (MIC) was tested on bacterial strains Escherichia coli (ATCC 35218), Staphylococcus aureus (ATCC 2913), Enterococcus faecallis (ATCC 29212) and multidrug resistant S. aureus and Klebsiella pneumoniae strains. The interaction of the formulations with the plasmid DNA was performed by the quantification of single-strand breaks, causing a change in the conformation of the genetic material from supercoiled (FI) to relaxed circular (FII). The initial characterization parameters of the liposomes showed that the vesicles were smaller than 150 nm, IPD around 0.280, negative surface charge -10.7 mV and pH close to neutral 7.39 shortly after synthesis. The best storage conditions were at room temperature and under refrigeration, in relation to the climatic chamber after 30 days of analysis. In the assays to evaluate the cytotoxicity, there were concentration-dependent effects, with success close to the positive control (H2O2). Higher concentrations of the formulations (>100 µg mL-1) also caused an increase in intracellular ROS. In the MIC assay, the concentration that inhibited 50% of the strains tested was above 256 µg mL-1. Liposomes were also unable to interact and cause degradation on direct exposure to plasmid DNA. Finally, in addition to having a potential biological effect on all tumor cells tested, the production of ROS proved to be an important mechanism of action of liposomes containing the actives, especially after 72h of incubation. Atualmente, o câncer e as infecções bacterianas estão entre as principais causas de óbito no mundo. A resistência dessas doenças aos tratamentos tradicionais são o principal fator para o desenvolvimento de estudos na área. A nanotecnologia, aliada ao reposicionamento de fármacos, pode melhorar o entendimento, biodisponibilidade, biocompatibilidade e, consequentemente levar à cura dos pacientes. O encapsulamento de fármacos pode, por exemplo, prolongar o tempo de circulação do medicamento, aumentando os seus efeitos terapêuticos, como, acumular-se no microambiente tumoral. O objetivo desta tese foi produzir, caracterizar e analisar a morfologia de lipossomas contendo Sb2O3 e As2O3 em diferentes formulações, além de avaliar sua atividade biológica em linhagens tumorais, cepas bacterianas e na clivagem do DNA plasmidial. Desse modo, vesículas lipossomais foram produzidas pelo método de evaporação em fase reversa, seguido da utilização de sonda de 750W com amplitude de 40%. Os lipossomas foram caracterizados pelas técnicas de avaliação do tamanho, índice de polidispersão (IPD), potencial zeta, análise do pH, teor do ativo, morfologia e componentes das formulações, foram utilizados potenciômetro previamente calibrado, espectrometria de emissão óptica por plasma indutivamente acoplado (ICP-OES), microscopia eletrônica de varredura com espectrometria dispersiva de energia (MEV-EDS) respectivamente. A estabilidade das formulações foi avaliada por meio de parâmetros físico-químicos em temperatura ambiente (25°C), refrigeração (4-8°C) e câmara climática (40°C) em três períodos diferentes. A avaliação da citotoxicidade foi realizada nos tempos de 24 e 72h, por meio dos ensaios Azul de Tripan, brometo de 3-4,5-dimetil-tiazol-2-il-2,5-difeniltetrazólio (MTT), Vermelho Neutro e dsDNA PicoGreen; com as linhagens tumorais NB4, HL-60, T98G, U87MG, HepG2, A375 e A549. Além disso, a produção de espécies reativas do oxigênio (EROs) foi avaliado pelo ensaio de Diclorofluoresceína (DCFH-DA) nas células tumorais. A concentração inibitória mínima (CIM) foi testada nas cepas bacterianas Escherichia coli (ATCC 35218), Staphylococcus aureus (ATCC 2913), Enterococcus faecallis (ATCC 29212) e em isolados multidroga resistentes S. aureus e Klebsiella pneumoniae. A interação das formulações com o DNA plasmidial foi realizada pela quantificação das quebras de fita simples, acarretando mudança de conformação do material genético de superenovelado (FI) para circular relaxado (FII). Os parâmetros iniciais de caracterização dos lipossomas demonstraram que as vesículas possuíam tamanho inferior a 150 nm, IPD cerca de 0,280, carga superficial negativa -10,7 mV e pH próximo ao neutro 7,39 logo após a síntese. As melhores condições de armazenamento foram à temperatura ambiente e sob refrigeração, em relação à câmara climática após análises de 30 dias. Nos ensaios para avaliação da citotoxicidade houve efeitos concentração-dependente, com êxito próximo ao controle positivo (H2O2). As maiores concentrações das formulações (>100 µg mL-1) também ocasionaram uma elevação de EROs intracelular. No ensaio da CIM, a concentração que inibiou 50% das cepas testadas ficou acima de 256 µg mL-1 . Os lipossomas também não foram capazes de interagir e causar degradação na exposição direta ao DNA plasmidial. Por fim, além de possuírem um potencial efeito biológico em todas as células tumorais testadas, a produção de EROs mostrou-se ser um mecanismo de ação importante dos lipossomas contendo os ativos, principalmente após 72h de incubação. |
| وصف الملف: | application/pdf |
| اللغة: | Portuguese |
| الوصول الحر: | https://explore.openaire.eu/search/publication?articleId=od______3056::55b36eecdf5c9bbca5a0578d08945dc9Test http://www.tede.universidadefranciscana.edu.br:8080/handle/UFN-BDTD/1073Test |
| حقوق: | OPEN |
| رقم الانضمام: | edsair.od......3056..55b36eecdf5c9bbca5a0578d08945dc9 |
| قاعدة البيانات: | OpenAIRE |
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